结球甘蓝叶片卷曲相关7个同源异型盒基因的克隆与表达分析

以结球甘蓝（brassicaoleraceal.）‘519’品系为试材，通过结球期茎尖和叶片以及莲座期茎尖和叶片的转录组对比分析，筛选出4个显著差异表达hb类基因，分别为bohat2、bohb12、bohb7和bohb27。进一步对上述4个基因以及调控拟南芥（arabidopsisthaliana）叶片卷曲但在结球甘蓝转录组中未检测到表达差异的基因bophb、bophv和borev进行了同源克隆。序列分析表明上述7个基因都含有同源异型域（homeodomain，hd），具有同源异型盒（homeobox，hb）蛋白家族的典型结构特征。blastp（蛋白序列与蛋白库做比对）表明它们与拟南芥的同源蛋白相似性高，来自结球甘蓝的bohat2、bohb12、bohb7、bohb27、bophb、bophv、borev与拟南芥中的hat2、athb12、athb7、athb27、phb、phv、rev蛋白同源，同源性分别为86%、80%、79%、60%、94%、95%和96%。blastp比对和进化树分析结果表明，bohat2属于hd-zipⅱ类，bohb12和bohb7属于hd-zipⅰ类，bohb27属于zf-hd，bophb、bophv和borev属于hd-zipⅲ类。bohat2、bohb12、bohb7、bohb27、bophb、bophv、borev在结球甘蓝莲座期到结球期的茎尖和叶片中均有表达，bohb12和bohb7在结球期叶片中表达量显著增高，分别是莲座期叶片的38.1倍和6.2倍，其余基因表达量差异不明显，表明bohb12和bohb7可能是结球甘蓝球叶自然卷曲过程中的主效调控基因。