甜樱桃della蛋白基因pagai的克隆与表达分析

利用rt-pcr和race技术从甜樱桃（prunusaviuml.）嫩叶中克隆了赤霉素信号转导途径中的关键负调控因子della蛋白基因cdna全序列，将其命名为pagai。该基因cdna全长2310bp，开放阅读框orf为1788bp，推测其编码一个含有595个氨基酸残基的多肽链，蛋白质分子量约64kd。生物信息学分析结果表明，pagai编码蛋白具有della蛋白保守结构域，其n端存在两个非常保守的酸性结构域della和vhynp作为信号感知区域，c端有vhiid、rver和saw结构域作为阻遏区域。pagai与其它植物的della蛋白具有较高的同源性，其中与苹果mdrgl2b蛋白同源性最高，达到84%。构建pgex-4t-1/pagai原核表达体系，并转化e.colibl21，经0.5mmol·l-1iptg诱导蛋白表达，sds-page检测获得了分子质量为91kd的融合蛋白，半定量rt-pcr分析表明，pagai在花、果实、叶片、韧皮部中普遍表达，在花与韧皮部中的表达远远强于在果实与叶片中的表达。