芥菜开花调控因子svp与flc蛋白互作的结构域筛选与鉴定

为阐明芥菜开花路径核心调节子svp与flc相互作用的结构域，从酵母重组质粒pgadt7svp、pgbkt7flc分别亚克隆了5个svp截短体（svp1~5）和5个flc截短体（flc1~5）。svp1~5与flc1~5编码蛋白的结构域均分别为mi、mik、k、ikc和kc。利用酵母双杂交体系，分别构建酵母猎物质粒pgadt7svp1~5与诱饵质粒pgbkt7flc1~5，并转化对应的酵母y187、y2hgold菌。酵母转化子y187［pgadt7svp2~5］能与y2hgold［pgbkt7flc］融合，并可在选择性固体培养基qdo/x/a上长出蓝色菌落，表明flc能与截短体蛋白svp2~5异源结合，svp的k域（svp3）可独立作用于flc蛋白。此外，y187［pgadt7svp］×y2hgold［pgbkt7flc2~5］也能同时激活报告基因aur1-c、his3、ade2、mel1，表明flc的k域（flc3）也可独立作用于svp。进一步研究发现：y187［pgadt7svp3］×y2hgold［pgbkt7flc3］正向杂交以及y187［pgadt7flc3］×y2hgold［pgbkt7svp3］载体互换后杂交均可相互作用，表明svp的k域（svp第96~173位氨基酸区域）与flc的k域（flc第114~167位氨基酸区域）能够异源结合，是介导svp与flc蛋白互作的关键结构域。