苹果花粉中与花柱s-rnase互作的γ–硫堇筛选及鉴定

以‘国光’苹果（s1s2）花粉为材料，成功构建了酵母pgadt7-cdna文库，转化效率约为1.2×106·μg-1，插入片段大小在300~2000bp之间。通过酵母双杂交方法，用苹果s2-rnase的c2hvc3区筛选文库获得一个长505bp的cdna片段，经分析发现该cdna序列上有一个261bp的开放阅读框（orf），该orf编码一个具n端信号肽的多肽，该成熟多肽由64个氨基酸组成，富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸，其c端有8个半胱氨酸和一个γ–硫堇功能域，结构预测显示其具有一个α螺旋，3个β折叠，4个二硫键，由此，推断其为苹果γ–硫堇，命名为mdd1。rt-pcr分析发现：mdd1基因在‘国光’苹果叶片、萼片、花瓣、子房、花药和花柱等组织中都有表达，但花药中表达量最高。酵母双杂交结果表明mdd1除了与苹果s2-rnase的c2hvc3区互作外，还与s1-rnase的c2hvc3区，s1、s2-rnase的成熟多肽区存在互作。初步认为：苹果γ–硫堇可能通过与s-rnase非特异性互作，作为花粉非s因子参与自交不亲和反应。