葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄a病毒的多重检测及其系统进化分析

葡萄卷叶伴随3型病毒（grapevineleafrollassociatedvirus-3，glrav-3）和葡萄a病毒（grapevinevirusa，gva）常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量rt-pcr与qrt-pcr方法研究了‘希姆劳特’葡萄（vitisviniferal.×v.labruscal.‘himrod’）中不同组织内病毒的相对积累量，结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cdna为模板，优化了rt-pcr多重扩增体系，可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染glrav-3与gva的‘藤稔’葡萄（vitisviniferal.×v.labruscal.‘fujiminori’）中，分别克隆了glrav-3外壳蛋白（coatprotein，cp）基因全长序列和gva部分基因组区域序列，后者包括cp基因的部分序列与病毒rna沉默抑制子（viralsuppressorofrnasilencing，vsr）基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明，不同glrav-3分离物的cp高度保守；而‘藤稔’葡萄的gva分离物包含多种变异株，具有准种病毒的特点。