平邑甜茶mhvpe基因ihprna干扰载体的构建及转拟南芥验证

根据平邑甜茶液泡加工酶（vacuolarprocessingenzyme）基因mhvpe（genbank登录号为fj891065）cdna序列，设计两对含有酶切位点的特异性引物f1/f2和r1/r2，以pmd-mhvpe质粒为模板，分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段pmd-f和pmd-r。将该正反义片段分别插入表达载体part27的相应位置，构建成了含有内含子发夹结构的ihprna表达载体part-rnai-mhvpe。通过农杆菌介导，用花序浸泡法转化拟南芥进行验证，经过抗性筛选和pcr检测，得到17株转基因阳性植株；半定量rt-pcr结果显示所获得的转基因拟南芥植株中atvpe同源基因的表达量明显降低，表明该干扰载体能够有效抑制vpe基因的表达，mhvpe基因的ihprna干扰载体构建成功，为进一步鉴定该基因的功能奠定了基础。