抗病基因vppr10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化

将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’，并对转化系统条件进行优化。首先将vppr10基因重组于中间表达载体pwr-ⅱ，得到重组质粒pwr-ⅱ-vppr10；继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌eha105，再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度od600=0.5，离体叶片侵染5min，在含有100μmol·l-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化；经pcr分析、southernblot和rt-pcr检测，证明目的基因vppr10已导入并整合到砀山酥梨基因组中；转化率为1.08%。