莲种子防御素基因序列分析及表达载体构建

从莲种子发育中期胚cdna文库中克隆得到的防御素基因cdna全长561bp，genbank登录号为ef421192。分析发现该基因234bp的开放读码框编码77个氨基酸的多肽序列，除信号肽序列外与其它不同来源的植物防御素基因有较高同源性，将其命名为nndefensin。nndefensin蛋白带有30个氨基酸的信号肽，具有8个半胱氨酸的高度保守结构等典型的植物防御素特征，成熟肽部分含有γ–硫素蛋白功能结构域。在系统进化上nndefensin与单子叶植物中的粳稻和小麦的同源蛋白，以及车前草同源蛋白亲缘关系较为接近。通过pcr扩增克隆莲胚防御素基因片段并连接到载体pbi121和带有花生油体蛋白种子特异启动子的载体paholeo17.8︰gus中，成功构建了35s启动子控制的植物表达双元载体pbi121-nndef和种子特异表达双元载体paholeo-nndef，为该基因的功能鉴定及通过基因工程方法提高转基因植物以及种子的抗病能力奠定基础。