龙眼14-3-3基因的克隆与原核表达

以龙眼(dimocarpuslonganlour.)为试材,应用同源克隆和race方法从花芽中获得了调控蛋白14-3-3的全长cdna序列,genbank登录号为fj479618(gi:218202931)。该cdna全长1121bp,包括一个783bp的开放阅读框,编码261个氨基酸,序列比较分析显示14-3-3cdna具有较高的保守性。半定量rt-pcr分析结果表明,14-3-3mrna在龙眼叶芽、叶片、花芽和成熟的花中都有表达,但在花芽中表达量最大。构建了pet14-3-3原核表达系统,将14-3-3全长cdna在大肠杆菌中表达,获得一个分子量约为34kd的可溶性融合蛋白,经westernblotting验证,该蛋白为14-3-3蛋白。