阔叶猕猴桃果实galdhcdna克隆及其在大肠杆菌中的表达

以猕猴桃属植物中果实维生素c含量最高的阔叶猕猴桃(actinidialatifoliamerr.)果实为试材,经rt2pcr扩增获得约110kb的l-半乳糖脱氢酶cdna片段。生物信息学分析表明,该cdna片段长为997bp,最大开放阅读框为960bp,可编码319个氨基酸残基,命名为algaldh,genbank登录号为eu525846,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物galdh核苷酸、氨基酸序列间的同源性分别在76%和70%以上,且具有醛酮还原酶的保守结构域。构建了其原核表达载体pet-algaldh并转化大肠杆菌bl21,经0.1mmol·l-1iptg诱导,获得具有较高活性的表达融合蛋白6×his-algaldh。经ni-his亲和磁珠分离纯化,获得单一的融合目的蛋白条带,测定其酶活为120pmol·min-1·mg-1。