农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究

利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎（plbs），研究了石斛兰对潮霉素的敏感性，并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮（as）等对石斛兰转化的影响。结果表明：带有pcambia1301的根癌农杆菌（agrobacteriumtumefaciens）eha105（简称为e1301）比带有相同表达载体的lba4404（简称l1301）对石斛兰的转化效率更高，前者约为后者的6倍；较高浓度的侵染液转化效率更高（od600为1.0或1.2时的转化效率约为od600为0.6或0.8时的2倍）；在农杆菌生长至od600值为0.8时，添加as可提高转化效率；而当od600为0.6、1.0和1.2时，添加as反而不同程度地降低转化效率；在各种处理中，od600为1.0时不添加as的转化效率最高，达44.4％。经过5~6个月选择培养，抗性小苗经gus染色、pcr和southern杂交检测证明为转基因植株。