无选择标记的植物表达载体的构建

以双元载体pbinplus为基础，在t-dna侧翼区通过两次特异pcr、酶切和连接相结合的方法,构建了一个无标记载体pbinmf(marker-freevector)。通过酶切后测序分析，这个无标记载体在t-dna左、右边界之间只有一个多克隆位点(multipleclonedsites,mcs)。为了验证该载体的遗传稳定性，将gus基因克隆到该载体上并通过农杆菌介导的方法转化番茄栽培品种moneymaker，特异pcr扩增目的基因和gus组织染色结果表明，gus基因已经整合进入番茄基因组并得以表达。该载体为今后直接获得无标记基因、生物安全的转化体，尤其为象马铃薯、木薯等无性繁殖材料的无标记基因转化提供了可靠、有效的工具。