香蕉穿孔线虫β-1，4-内切葡聚糖酶基因的克隆与特征分析

植物寄生线虫的分泌物在线虫的侵染过程中具有重要的作用，其中纤维素水解酶是研究的较多的主要分泌物之一。采用rt-pcr和race方法，从香蕉穿孔线虫（radopholussimilis）中获得编码β-1，4-内切葡聚糖酶基因的cdna序列，命名为rs-eng-1（genbank登录号为eu414839）。该cdna序列全长为1630bp，包含一个1404bp的开放阅读框（orf），编码含467个氨基酸的蛋白，理论分子量与等电点分别为48.22kd和6.04。序列分析表明该酶含有糖基水解酶家族5（ghf5）的保守结构域，n端具有22个氨基酸残基组成的信号肽，c端含有细菌式样的纤维素结合域（cbdⅱ）。原位杂交结果显示此基因在相似穿孔线虫的食道腺部位表达，并且southern结果显示其为多拷贝基因。cdna与基因组dna重叠分析表明，此基因包含6个内含子，切割点符合5'-gt...ag-3'的规律。进化分析显示该酶与细菌bacillussubtilis和erwinacarotovora分泌的纤维素酶属于同一支，推测其来源于细菌的水平基因转移。