蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因cplea的克隆及表达分析

从蜡梅（chimonanthuspraecox）花cdna文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白（lea）基因的cdna全长序列，命名为cplea（genbank登录号：jf412788），该基因cdna含有一个273bp编码91个氨基酸的开放阅读框，从蜡梅基因组dna中扩增该基因发现，该基因含有两个大小分别为35bp和707bp的内含子。生物信息学分析显示，cplea的编码蛋白含有4个胚胎晚期丰富蛋白第3族lea蛋白特有的11个氨基酸的基元重复序列，进化树分析表明该编码蛋白与榛子的lea蛋白亲缘关系最近。通过原核表达获得了与预期大小一致的融合蛋白。实时荧光定量pcr分析表明，该基因在蜡梅成熟种子中表达量最高，在根中几乎不表达；在盛开期花的各个部位中又以雌蕊中的表达量最高；在花发育早期表达量较高，随后下降并保持相对稳定，在衰败期突增并达到最高；检测该基因在脱落酸（aba50μmol·l-1）、低温（4℃）、高温（42℃）、干旱（30%peg6000）和高盐（nacl1mol·l-1）5种外源非生物胁迫因子作用下的表达特性。结果表明，该基因能够被aba、低温、高温、peg和nacl诱导表达，并在随后的时间内呈现出不同的表达模式。表明cplea可能在蜡梅花发育和多种非生物胁迫响应中发挥作用。