甜瓜α–甘露糖苷酶基因促进果实成熟功能的瞬时表达分析

为了研究α–甘露糖苷酶（α-man）基因在甜瓜果实成熟过程中的功能，应用农杆菌介导的瞬时表达技术，分别将含有甜瓜α–甘露糖苷酶基因超表达载体ppzp221-man、两个rnai载体part-man1和part-man2的农杆菌菌液注射至甜瓜绿熟期果实，通过观察果实成熟表型初步鉴定该基因的功能。结果表明，菌液浓度od600=1.2时果实表型比率最高，在果实蒂部表型居多。α–甘露糖苷酶活性测定结果显示，与非注射部位相比，注射超表达载体部位的组织α–甘露糖苷酶活性较高，而注射rnai载体的组织α–甘露糖苷酶活性较低。rt-qpcr结果显示，与非注射部位相比，注射ppzp221-man的部位α-man基因表达约是对照的1.2倍，而注射part-man1和part-man2的部位α-man基因的表达均有所下降，分别是对照的47%和37%。同时对甜瓜果实成熟相关的6个候选基因在注射部位的表达情况进行了分析，结果显示，这些基因在注射超表达载体的果实部位均上调表达；而在注射两种rnai载体的果实部位均下调表达。这些结果表明甜瓜α–甘露糖苷酶基因在果实成熟过程中具有促进成熟的作用。