芜菁花青素合成关键酶dfr基因启动子的克隆及功能分析

在已经克隆的‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁二氢黄酮醇4–还原酶（dfr）基因的基础上，通过染色体步移法从两种芜菁基因组中克隆了brdfr1和brdfr2基因上游1296和1297bp的启动子序列。生物信息学分析表明，启动子片段中包含tatabox、caatbox、光调控元件、aba应答元件、伤害应答元件、低温应答元件、防御与胁迫应答元件、meja应答元件等多个顺式作用元件。启动子brdfr1p和brdfr2p仅在15个核苷酸位点存在差异。将brdfr1p和brdfr2p分别连接到pcambia1301植物表达载体上，构建promoter::gus载体，通过农杆菌介导遗传转化烟草。gus组织化学染色检测表明，brdfr1p和brdfr2p均能驱动gus基因表达。构建brdfr1p和brdfr2p的一系列缺失体，融合gus基因后遗传转化烟草。染色结果表明，brdfr1p和brdfr2p缺失片段均具有相应的起始下游基因转录的活性特征。