苹果nad–苹果酸酶基因的克隆及在不同组织和果实发育阶段的表达分析

nad-malicenzyme（nad-me）是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果（malus×domesticaborkh.）叶片为试材，通过同源比对和rt-pcr技术，克隆获得2个nad–苹果酸酶基因（mdnad-me1和mdnad-me2）。其orf分别为1785bp和1818bp，推测其分别编码595和605个氨基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示，含有5个保守的氨基酸区域（ⅰ~ⅴ），包含2个功能结构域：malic和nad_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示，mdnad-me1属于α组双子叶亚组，mdnad-me2属于β组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示，mdnad-me在被检测的组织中呈组成型表达，且在多种组织中mdnad-me1表达量高于mdnad-me2。在富士苹果果实不同发育阶段，mdnad-me1与mdnad-me2具有不同的表达模式。以上结果表明，克隆得到的mdnad-me1和mdnad-me2属于植物nad-me，在苹果的生长和发育过程中mdnad-me1和mdnad-me2可能起到不同作用。