杜梨类钙调磷酸酶b亚基蛋白基因pbcbl2的克隆和功能初探

类钙调磷酸酶b亚基蛋白（calcineurinb-likeprotein，cbls）是植物中一类重要的钙离子传感器，参与调控植物生长发育及逆境胁迫响应过程。为了探明杜梨cbls家族成员pbcbl2的序列特征和表达模式，以杜梨（pyrusbetulaefoliabunge）幼苗为试材，运用est搜索结合race技术、染色体步移法对pbcbl2的cdna、dna和启动子进行克隆，采用半定量rt-pcr和原核表达研究该基因在非生物胁迫下的表达模式。结果表明，pbcbl2基因cdna序列长681bp，编码一个含有226个氨基酸残基的蛋白。基因组dna序列长1927bp，包括8个外显子和7个内含子，启动子序列包含光反应元件、厌氧诱导必需顺式作用元件、赤霉素反应元件和水杨酸响应顺式作用元件。pbcbl2编码的多肽具有植物类钙调磷酸酶b亚基蛋白结合ca2+所必需的4个ef手型结构和1个典型的植物钙调磷酸酶a亚基结合位点。未经处理的杜梨幼苗（对照）根和叶中未检测到pbcbl2的表达，pbcbl2的表达受nacl、peg6000、甘露醇和aba诱导上调。pbcbl2转入大肠杆菌bl21（de3）后，能够明显减轻nacl、甘露醇和peg6000对该菌株的生长抑制。pbcbl2基因具备植物cbls基因家族的固有特征，对盐碱、干旱、渗透胁迫和aba处理均存在转录响应，大肠杆菌转入该基因后能够提高对盐胁迫和渗透胁迫的耐受能力。