葡萄果实β–葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及活性检测

以‘玫瑰香’葡萄着色期的果肉为试材，通过反转录技术克隆了aba合成相关酶β–葡萄糖苷酶基因vvbg1的1518bp编码区核苷酸序列，其编码1个含有505氨基酸的多肽。生物信息学分析表明，vvbg1含有1个跨膜区和糖基水解酶1超家族保守域。通过bamhⅰ和xhoⅰ限制性内切酶将除去信号的编码区克隆到原核表达载体pet28a（+）中，并转化大肠杆菌表达菌株bl21（de3），成功诱导并纯化了vvbg1融合蛋白。经过透析复性和超滤浓缩得到了0.8mg·ml-1可溶的融合蛋白。通过纯化蛋白葡萄果肉均浆液孵育试验和gc–msaba含量分析证实了葡萄果实中β–葡萄糖苷酶vvbg1具有较高的生理活性。