大白菜耐旱相关基因bpnfya5的克隆及功能初步分析

以拟南芥（arabidopsisthaliana）nfya5基因（genbank登录号：at1g54160）的序列为基准，通过比对获得芸薹属大白菜[brassicacampestrisl.ssp.pekinensis（lour.）makino]同源est序列；采用电子克隆的方法从大白菜中克隆到相关基因全长序列，命名为bpnfya5。该基因包含3个内含子，其推导蛋白与拟南芥nfya5ccaat-box结合域相似性达92.6%。对大白菜进行干旱胁迫，发现bpnfya5显著上调表达。构建了植物过表达载体pbin-nfya5和rna干扰载体pfgc-nfya5，通过根癌农杆菌（agrobacteriumtumefaciens）介导浸花法转化拟南芥。经除草剂、潮霉素筛选及pcr鉴定获得转基因植株。采用干旱和10%peg6000模拟亏水胁迫，对转基因材料的t2代进行了耐旱性鉴定。结果显示：过表达植株（ol）较野生型植株（wt）和干扰表达植株（ri）叶绿素含量高；渗透胁迫下ol植株脯氨酸含量迅速积累，积累量显著高于wt和ri植株；控水干旱2周ol株系较wt及ri材料具有更好的干旱耐受性；ol株系离体叶片的失水速率较小，叶片有效水分利用率较wt和ri高。结果表明所克隆的基因bpnfya5在亏水胁迫调控中具有抗旱作用。