马铃薯卷叶病毒缺失突变cp基因的原核表达及抗血清的制备

利用rt-pcr扩增马铃薯卷叶病毒（plrv）外壳蛋白（cp）基因（plrv-cp），回收大小约630bp的特异性扩增片段并进行t-a克隆，测序表明该基因长度为627bp，与已报道的36个plrv-cp基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pbad/thio-topo为起始载体，构建了plrv-cp基因的原核表达载体pbad-lrcp。以pbad-lrcp为模板，用pcr法删除了该基因富含精氨酸稀有密码子的第52~177核苷酸，获得了plrv缺失突变cp基因的原核表达载体pbad-lrcp-126。用阿拉伯糖诱导工程菌top10（pbad-lrcp-126），获得了34kd的诱导表达的融合蛋白（重组cp）。用镍离子亲和层析法从包涵体中纯化出了高纯度的重组cp，用纯化的重组cp作抗原免疫家兔获得了plrv特异性的抗血清，间接elisa检测显示效价为1︰12800。本研究结果为利用重组cp作抗原大量制备plrv抗血清奠定了基础。