猕猴桃花青素合成途径基因acchs和acldox的克隆与表达分析

根据物种水平上蛋白保守序列设计特异引物，扩增获得‘红阳’猕猴桃花青素合成途径中查尔酮合成酶（chalconesynthase，chs）和无色花青素双加氧酶（leucoanthocyanidindioxygenase，ldox）基因的特异片段，用race（rapid-amplificationofcdnaends）技术克隆出这两个基因的cdna全长，长度分别为1501bp（acchs）和1381bp（acldox），分别编码389个和355个氨基酸。通过比对发现acchs与棉花（gossypiumhirsutum）、山茶（camelliajaponica）和黄蜀魁（abelmoschusmanihot）的chs序列相似性较高，达到95%，与葡萄（vitisvinifera）和苹果（malus×domestica）的相似性分别为94%和93%；acldox与山葡萄（vitisamurensis）和葡葡的相似性分别高达94%和93%。用实时荧光定量pcr分析acchs和acldox在‘红阳’（红肉）、‘金魁’（绿肉）和‘金农’（黄肉）3种不同果肉颜色的猕猴桃内果皮中的表达，发现acchs的表达量在‘红阳’果实转色期（花后65d）较高，而在‘金农’开花后表达量呈持续下降趋势；acldox在‘红阳’果实发育早期呈上升趋势，花后65d后迅速下降，在‘金魁’果实发育后期呈明显上升趋势，在‘金农’开花后呈持续下降趋势。