发根农杆菌k599对菊花活体转化及其高效再生

发根农杆菌k599侵染菊花无菌苗刻伤的叶片形成转基因不定根，生根频率为88.0%；不定根经过诱导培养形成愈伤组织，并再生完整植株，愈伤组织诱导率和分化率分别为75.0%和63.3%。诱导的不定根和再生植株经过pcr鉴定含有k599ri质粒中的rolc基因，qrt-pcr检测显示rolc基因在再生转基因植株中实现了正常表达。再生植株表现出矮缩、多毛状根特征，并能正常开花。建立的利用活体材料直接作为发根农杆菌k599侵染的受体诱导不定根的遗传转化体系，能克服假阳性不定根的出现；同时，利用不定根繁殖过程中顶端生长点区域无菌的特点，通过截取不定根顶端靠近生长点区域进行继代培养，结合使用头孢霉素杀菌，能达到有效抑制和杀灭农杆菌的目的，在随后的不定根诱导愈伤及分化过程中无须再使用抗生素杀菌，提高了转基因再生效率，为菊花的矮化育种和目标基因的转移提供了良好的试验体系。