猕猴桃galur表达与抗坏血酸积累的关系

通过rt-pcr从美味猕猴桃（actinidiadeliciosa）果实中克隆了d–半乳糖醛酸还原酶（galur）全长cdna序列，并分析其序列特征，进行原核表达，制备特异抗体，分析其mrna及蛋白表达水平与果实发育过程及不同组织中抗坏血酸（asa）合成和积累的关系。结果表明：克隆的galurcdna（genbank登录号为gu339035）包含的最大开放阅读框（openreadingframe，orf）为990bp，编码329个氨基酸残基，预测分子量为37kd，与报道的草莓等其他植物galur具有较高的相似性。构建的pet-32a（＋）-galur载体在大肠杆菌bl21（e.colibl21）中异源表达后，获得了主要以包涵体存在约58kd的融合蛋白galur-his（his约21kd）。以该蛋白制备抗体，与重组蛋白的western杂交表明该抗体能与galur蛋白发生特异反应。对猕猴桃可溶性蛋白杂交显示，猕猴桃体内galur蛋白的分子量约37kd。在猕猴桃不同组织和发育过程中，galur表达水平与asa含量表现为高度一致，但前体饲喂发现，与l–半乳糖相比，d–半乳糖醛酸并不能有效促进猕猴桃asa的合成。这些结果表明以单体形式存在的galur与猕猴桃asa合成有着密切关系，但它可能并不是猕猴桃asa积累的主要调控环节。