大白菜、青花菜和叶用芥菜体细胞杂交种形态学与细胞学特性鉴定

为拓宽十字花科蔬菜育种种质资源，以大白菜（brassicacampestrisl.ssp.pekinensis）、青花菜（b.oleraceal.var.varitalica）和叶用芥菜（b.junceal.czern）的子叶、下胚轴为材料，分离、纯化原生质体，采用40%聚乙二醇（polyethyleneglycol，peg）融合法进行原生质体融合。融合细胞在附加0.2mg·l-12，4-d+0.5mg·l-16-ba+0.1mg·l-1naa+0.1mg·l-1激动素（kinetin）的改良k8p培养基中液体培养，当细胞分裂至8~10细胞期时，将分裂的细胞包埋于0.15%琼脂糖，然后在添加0.3mol·l-1蔗糖和2mg·l-16-ba+2mg·l-1玉米素（zeatin）+1mg·l-1naa+0.5mg·l-1kinetin的kao培养基中诱导愈伤组织。将培养获得的936个愈伤组织转到3种不定芽诱导培养基ms+5mg?l-1zeatin+2mg·l-1iaa；ms+2mg·l-1zeatin+2mg·l-1iaa；ms+0.5mg·l-16-ba+0.5mg·l-1naa上诱导芽分化，当芽长3cm左右时，转到1/2ms+0.2mg·l-1naa的生根培养基上诱导生根，共获得了96株再生植株，对其进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。形态学观察显示再生植株表型变化大，包括3个亲本的中间型或两个亲本的中间型；pcr技术鉴定结果显示96株杂种植株中93株为细胞质雄性不育特性；染色体计数显示，再生的植株染色体数变化范围广（2n=38~64），但未发现染色体数总和与3种融合亲本染色体数总数（2n=74）相一致的个体。基因组原位杂交（genomicinsituhybridization，gish）和扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，aflp）分析结果表明，再生植株基因组中分别检测出大白菜、青花菜、叶用芥菜的dna片段，证实了大白菜、青花菜、叶用芥菜种间体细胞杂交种的真实性。