反义CENP-B对HeLa(Tet-off)细胞增殖状况的影响

为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP-B表达的变化情况,用原核表达的融合蛋白GST-CENP-B免疫Balb/c小鼠,制得抗CENP-B的鼠抗血清(MaCenpB).转染了含有反义CENP-B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞(HaCb),用Northernblot和Westernblot研究了转染后细胞内源CENP-B基因表达的抑制情况.生长曲线表明,反义CENP-B抑制HeLa(Tet-off)细胞增殖,使倍增时间延长了32.8h.流式细胞光度术分析表明,较之HeLa(Tet-off)细胞,HaCb的G1期比例增加(DG1=9%),S期比例减少(ΔS=11%).同时,有丝分裂指数(MI)大大降低;间接免疫荧光分析表明,HaCb的着丝粒组装受到抑制.这说明,CENP-B的正常表达对于细胞的增殖是必要的.