大麦cDNA AFLP技术体系的优化及其应用

为构建适合分析大麦杂种优势的cDNAAFLP技术体系，以4个大麦不育系、2个大麦恢复系以及按4×2配制的8个杂交种为材料，对影响大麦cDNAAFLP技术体系的几个关键因素进行了研究。结果表明，大麦cDNAAFLP技术按以下程序可得到多态性好的清晰条带：使用百泰克公司的TRIpureReagent总RNA提取试剂可提取到高质量的叶片总RNA；用TaKaRa的MMLVRTase反转录合成双链cDNA；用MseⅠ和EcoRⅠ酶切6h，再用T4连接酶15℃连接接头18h；预扩PCR反应的dNTP终浓度为0.2mmol·L-1，扩增20循环效果最好；预扩产物稀释20倍后进行选择性扩增，最终用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离条带。利用该cDNAAFLP体系对参试杂交种及其亲本的谱带类型进行了分析，亲本与杂种之间共扩增出7种类型的谱带，分别是共同表达型（P1P2F1）、P1表达型（P1）、P2表达型（P2）、F1表达型（F1）、P2F1表达型（P2F1）、P1F1表达型（P1F1）和P1P2表达型（P1P2）。其中差异谱带类型可分为四种表达模式:（1）单亲显性表达型，包括P2F1表达（P2F1）和P1F1表达（P1F1）；（2）单亲沉默表达型，包括仅P1表达（P1）和仅P2表达（P2）；（3）杂种上调表达型，即仅F1表达（F1）；（4）杂种下调表达型，即仅P1P2表达（P1P2）。