农杆菌介导的小麦成熟胚转化的影响因素

为了研究农杆菌介导的小麦成熟胚转化的影响因素，以6个小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,以EHA105和LBA4404农杆菌为供体(含有pCAMBIA1305双元载体)材料，研究了诱导培养基、分化培养基、农杆菌菌株、愈伤组织诱导培养时间、农杆菌菌液浓度和侵染时间对小麦成熟胚愈伤组织诱导、分化、再生的影响。结果表明：（1）以小麦品种小偃22的成熟胚为材料,获得最佳的诱导培养基方案（MS+2mg·L-12,4D+0.5mg·L-1KT+500mg·L-1水解酪蛋白+150mg·L-1天门冬酰胺）和分化培养基方案（MS+2mg·L-1ZT+0.5mg·L-1KT）；（2）6个小麦品种中，洛阳8176和张掖春小麦具有较强的再生能力，筛选培养后较多的愈伤组织分化出小绿点；（3）洛阳8716和张掖春小麦的成熟胚，经愈伤组织诱导培养6-7d，农杆菌侵染后愈伤组织再生能力强；（4）农杆菌侵染后愈伤组织的再生能力与农杆菌菌株的关系不明显，而与小麦品种基因型、侵染时间和菌液浓度有较明显的关系；（5）以小麦洛阳8716和张掖春小麦成熟胚愈伤组织为受体，黑暗条件下诱导培养6-7d，在24±1℃黑暗条件下共培养3d和500mg·L-1羧苄青霉素(Cb)除菌及10mg·L-1潮霉素筛选处理后，共得到分化植株23株，其中以洛阳8716为受体材料，由农杆菌LBA4404和EHA105转化得到的植株分别为11株和4株，植株分化率分别为3.57%和1.31%；以张掖春小麦为受体材料，由农杆菌LBA4404和EHA105转化得到的植株分别为5株和3株，植株分化率分别为1.57%和1.14%。