一种快速同步检测小麦黄花叶病毒和中国小麦花叶病毒的方法

针对小麦黄花叶病毒（WYMV）和中国小麦花叶病毒（CWMV）在症状、传播途径、发生规律等方面高度相似、难以用常规手段鉴定的问题，根据两种病毒基因序列的异同点设计了三条引物CWWYR2、CW1F2和WY1F2，以植物总RNA为模板、CWWYR2为引物反转录合成cDNA。通过优化建立了一种同步检测两种病毒的反应体系：cDNA1.6μL，引物（10μmol·L-1）各0.4μL，10×PCRBuffer（不含Mg2+）2μL，dNTPs（10mmol·L-1each）0.4μL，TaqDNA聚合酶（5U·μL-1）0.8μL，MgCl2（25mmol·L-1）0.8μL，ddH2O13.2μL，合计20μL；PCR反应条件：94℃预变性5min，94℃50s，50℃50s，72℃90s，共30个循环，72℃延伸10min。WYMV和CWMV的PCR扩增预期目的片段分别为508和918bp。利用该方法对江苏高邮、扬州和大丰的样本进行检测，它们分别为WYMV、WYMV、CWMV单一侵染，证明该方法准确性较高，可用于两种病害同步检测。