小麦和荞麦过敏原的分离与免疫学特性初步鉴定

为了提取、分离小麦(Triticumaestivum)和荞麦(Fagopyrumesculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结合过敏原的特性,通过免疫印迹(Western-Blotting)鉴定其中的过敏原成分,然后用离子交换层析(DE-52)对总蛋白进行初步分离,并用Western-Blotting鉴定分离后组份的免疫学特性.SDS-PAGE分析显示,小麦蛋白条带共有18条,其中主要条带有12条(55、42、39、36、29、27、23、21、18、15、12、9kD);荞麦蛋白条带共有17条,其中主要条带有8条(55、44、36、32、22、16、13、10kD).Western-Blotting鉴定表明,小麦阳性条带有9条(36、32、29、26、23、18、15、12、9kD),其中23kD的过敏原特异性最强;荞麦阳性条带有5条(55、36、32、29、22kD),其中22kD的过敏原特异性最强.DE-52阴离子交换层析分离后经Western-Blotting分析显示,分离后过敏原的相对含量均有显著提高,且依然具有较强的免疫学活性,如经纯化后荞麦22kD的过敏原相对含量由10.73%提高到21.07%.初步鉴定出小麦的主要过敏原为23kD蛋白,而荞麦的主要过敏原为22kD蛋白.