小麦品种“陕253”PDI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化

为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶（PDI），运用RTPCR方法克隆出小麦品种“陕253”PDI基因的cDNA序列，基因登陆号为HQ911363。序列分析表明，HQ911363全长为1539bp，编码512个氨基酸，含有PDI典型的异构酶活性的催化位点CGHC和内质网驻留信号肽KDEL。构建该基因的原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21（DE3）中经IPTG诱导表达融合蛋白，并对表达蛋白进行了纯化。SDSPAGE及Westernblot检测证实融合蛋白诱导表达并纯化成功。