大麦脱水可诱导启动子的克隆及其瞬间表达载体的构建

为进一步研究脱水可诱导启动子的结构和功能，并为开展禾谷类植物转基因研究选择启动子提供依据，用大麦品种撒哈拉幼苗提取的总DNA为模板，利用设计合成的引物对进行PCR定向扩增，获得了HVA1s、Dhn4s和Dhn8s启动子片段。通过分离、纯化、酶切和连接，把启动子片段分别插入到带有GFP和GUS报告基因的表达栽体质粒中。经测序确认，目标启动子片段与原报道的同源启动子序列一致性达95．3％以上。HVA1s、Dhn4s和Dhn8s启动子在构建的瞬间表达载体pHVA1sGFPG、pDhn4sGFPG、Dhn8sGFPG和pHVA1sGUSR、pDhn4sGUSR、pDhn8sGUSR中，都具有启动表达报告基因的能力，通过基因枪转化大麦幼苗可有效启动gfP和gus基因瞬间表达。