华山新麦草特异重复序列的筛选、克隆及Southern杂交分析

为了寻找华山新麦草特异重复序列，以华山新麦草、栽培一粒小麦、栽培二粒小麦、野生一粒小麦、野生二粒小麦、圆锥小麦、阿拉拉特小麦、茹科夫斯基小麦、斯卑尔脱小麦、普通小麦“中国春”(CS)为材料，利用200条RAPD引物筛选出11条华山新麦草特异条带（命名为RHS1~RHS11），并对这些条带进行回收、克隆、测序。将序列在NCBI数据库中进行比对，其中RHS1、RHS2、RHS3、RHS4、RHS6、RHS8、RHS9在NCBI数据库中未发现与其同源的序列。RHS5、RHS7、RHS10、RHS11在NCBI数据库中有相似序列，其最高覆盖度和最高相似性分别为：83%和100%、99%和85%、49%和100%、19%和83%。通过Southernblotting进行序列特异性检测，RHS1、RHS2、RHS4、RHS6和RHS9等5个克隆在10种材料中都没有杂交信号；RHS7、RHS10和RHS11在华山新麦草及其他9种材料中都有弥散分布的杂交信号；RHS3、RHS5和RHS8只在华山新麦草中有杂交信号的序列。这些结果说明RHS3、RHS5、RHS8为华山新麦草基因组特异重复序列。