共生细菌SB1降解聚乙烯醇的研究Ⅱ．共生细菌SB1聚乙烯醇氧化酶的产生、纯

共生细菌SB_1接种在0.3%聚乙烯醇(PVA)培养基中,30℃摇床振荡培养(500mL三角瓶)或发酵罐(1000L)通气培养时,PVA氧化酶产生的高峰在48h或40h.离心收集的上清液采用40%-50%饱和度的硫酸铵分级沉淀DEAE-Sephadex离子交换柱和Cibacron蓝-Sepharose4B亲和柱层析等纯化步骤,PVA氧化酶收得率30%,比活力提高31倍,该酶经凝胶电泳后,用硝基四氮唑蓝进行活性染色,呈现四条谱带,PVA氧化酶与PVA作用,可释放H2O2,同时伴随着粘度降低,PVA氧化酶反应的最适pH为7.0,最适温度为40℃,该酶置-5℃贮存较稳定,贮存500天,其活力仍保留近50%,在所测试的金属离子和化学试剂中,Pb2+和水杨酸可使PVA氧化酶活力完全丧失。而Ba2+与NaN3则对酶活力有较强的激活作用。