水稻L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆和原核表达及抗体的制备

通过RT-PCR从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶（GLDH）的全长基因。序列分析表明水稻GLDH基因全长1752 bp，亚克隆其部分成熟蛋白编码基因（789 bp），利用基因重组技术构建了E.coli/pET30a-GLDHe,经酶切鉴定，DNA测序证实重组质粒构建正确；将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta，IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析证实表达出36 kD左右的蛋白。用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体，用Western-blotting检测抗体的特异性及效价，结果表明抗体血清效价为1：1000，在加IPTG诱导后的菌液中可以杂到相应的蛋白条带（36 kD），在水稻叶片样品中能杂到一条36 kD的蛋白条带。