茶氨酸生物合成基因工程菌的构建及重组酶的表达

将来源于Escherichia coli DH5α的γ–谷氨酰基转肽酶基因克隆到高表达质粒pET–32α中，并转化E？coli BL21，构建茶氨酸生物合成的基因工程菌。工程菌在温度为20 ℃，OD600 nm为1.5，IPTG浓度为0.1 mmol/L，培养基初始pH为7的条件下，诱导培养6 h，γ–谷氨酰基转肽酶的酶活力达(4.41±0.17) U/mL，大约是出发菌株E？coli DH5α的18.4倍。直接以工程菌为催化剂，在200 mmol/L谷氨酰胺、1.5 mol/L乙胺盐酸盐、pH 10、20 ℃的条件下，反应6 h，茶氨酸合成量达12.6 mg/mL，L–谷氨酰胺转化率为41.05 %。