建鲤IL–1β和IL–8基因实时荧光定量RT–PCR 检测方法的建立

根据GenBank上的基因序列，在保守区设定并合成特异性引物，选择β–actin作为内参基因，采用SYBR Green I染料法，进行熔解曲线分析和标准曲线的制作。熔解曲线表明，β–actin、IL–1β、IL–8的基因产物均为特异性产物，其Tm值分别为86、82.5和84 ℃；标准曲线表明，各基因Ct值的检测范围为12～32，扩增效率分别为96.3%，103.2%和102.6%，具有良好的线性关系，且r2均大于0.990；组内变异系数分别为0.14%～0.86%，0.18%～0.93%和0.13%～0.86%；用建立的方法检测健康建鲤头、肾组织中IL–1β、IL–8的表达情况，相对表达量分别为1.09和1.71。综合分析，建立的建鲤IL–1β、IL–8基因实时荧光定量PCR方法具有检测范围广，扩增效率高，特异性强，重复性高的特点，可用于建鲤IL–1β、IL–8基因的表达测定。