高粱SbCAD4基因的克隆与序列分析及原核表达分析

以高粱品系早亨加利为材料，通过RT–PCR扩增，克隆高粱SbCAD4基因。测序结果表明，克隆的SbCAD4基因与NCBI基因库中高粱IS11861品系只在编码序列第548位有1个碱基的差异，而二者的氨基酸序列完全一致。进化树分析结果表明，SbCAD4与拟南介、水稻、玉米的木质素合成CAD基因位于同/L1个群中。比对分析结果表明，SbCAD4与木质素合成基因具有相同的结构域。将构建正确的重组质粒(pMAL–SbCAD4)转化入大肠杆菌菌种BL21中进行诱导表达的结果表明，IPTG的最佳诱导浓度为0.5 mmol/L。经Amylose Resin亲和层析柱纯化后，SbCAD4融合蛋白在SDS–PAGE电泳分析时呈现１条蛋白带。利用纯化的蛋白对SbCAD4进行酶活测定，其酶动力学参数Km值为5.2 μmol/L，Vmax为5.8 μmol/(min?mg)，表明SbCAD4具有肉桂醇脱氢酶活性