生长素结合蛋白AtTIR1和IAA28的原核表达及纯化

以pGEX–KG为骨架，运用分子克隆方法构建了生长素结合蛋白AtTIR1和 IAA28的原核表达载体，通过转化不同表达菌株探索了2种蛋白的诱导表达条件。结果表明：在0.4 mmol/L IPTG诱导下，GST–IAA28融合蛋白在表达菌株Tuner中的表达量最高，其适宜诱导温度为16 ℃；在0.6 mmol/L IPTG诱导下，BL21(DE3)中GST–IAA28的表达量最高；在各种浓度的IPTG诱导下，Rosetta中的GST–IAA28的产量均不高；在25 ℃和0.4 mmol/L IPTG诱导条件下，Rosetta中的GST–AtTIR1表达总量最高，每克细菌可诱导出约0.2 mg的目标蛋白，但BL21(DE3)菌种中的GST–AtTIR1表达量很低。利用GST SefiroseTM resin亲和树脂对表达的蛋白进行纯化，获得了较纯的AtTIR1和IAA28蛋白。