冰核细菌Erwinia ananas 110 冰核基因iceA的原核表达及冰核活性分析

为获得具有高冰核活性的基因工程菌，从冰核细菌Erwinia ananas 110扩增冰核基因iceA，将其克隆到pMD19–T载体上，转化大肠杆菌DH5α，单、双酶切鉴定并测序；阳性克隆目的片段亚克隆到表达载体pET–23a(+)上，转化大肠杆菌DH5α，单、双酶切鉴定重组质粒；阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，并经IPTG诱导表达。SDS–PAGE电泳检测表明，冰核基因iceA能够并以包涵体形式表达，相对分子质量约为180 000。冰核活性测定结果表明，重组菌BL21(DE3)pLysS/pET–ice的冰核活性与野生冰核细菌Erwinia ananas 110在–5、–4、–3、–2 ℃下无明显差别。