菊花脑热激蛋白70基因的克隆及表达分析

采用同源克隆结合RACE技术从菊花脑叶片中克隆菊花脑(Chrysanthemum nankingense)热激蛋白70基因 (hsp70) 的cDNA序列，并通过荧光定量PCR(qRT–PCR)分析菊花脑在40 ℃高温下热激不同时间(0、0.5、1、2、3、6 h)后叶片中hsp70基因的表达差异。结果表明，克隆的cDNA序列全长2 224 bp，与水母雪莲花、紫茎泽兰的hsp70基因在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为88%、98%，表明该序列为菊花脑的hsp70基因序列(GenBank登录号，KJ561911)，命名为Cnhsp70。Cnhsp70基因的开放阅读框为1 944 bp，其编码的蛋白(647个氨基酸) 的相对分子质量约为70 900，含有HSP70家族序列标签。qRT–PCR分析的结果表明，Cnhsp70基因的表达在热激后短时间内迅速上调，热激3 h达到最高，热激6 h时表达量迅速下调。