重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB对人体肠上皮细胞层功能的影响

利用Transwell小室体外建立人结肠细胞T84上皮细胞层，分析不同质量浓度重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB（1000、100、10ng/mL）对上皮细胞层跨膜电阻（TER）的影响；通过免疫荧光染色分析TcdB对上皮细胞层结构的影响；运用荧光标记葡聚糖作为指示剂，检测毒素作用后上皮细胞层的旁通路渗透情况；通过细胞毒性分析，检测上皮细胞层功能受损情况下，TcdB的跨膜渗透。结果发现：重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB能引起剂量依赖性单层上皮组织跨膜电阻降低和渗透性增加，在24h内质量浓度为1000、100、10ng/mL的TcdB能导致上皮细胞层分别丧失100%、70%、50%电阻力，同时分别引起30%、20%、10%的葡聚糖渗透；上皮细胞层受损后，大分子毒素通过旁通路的非正常跨膜渗透也增加。共聚焦分析显示上皮细胞层的细胞间紧密连接结构受损。综上所述，艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB介导的体外培养人T84肠上皮细胞层功能损伤主要表现为电生理学功能异常，旁通路渗透性增加，细胞间紧密连接结构破坏。