HIV-1 Tat-TAR结合抑制剂筛选模型的构建

将HIV-1Tat（1-86aa）编码序列插入原核表达质粒pET28a中，转化E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导Tat蛋白表达，并用Ni+金属螯合层析介质纯化；把TARDNA序列插入到含有T7启动子的载体pBluescriptIISK(+)中，用T7RNA多聚酶体外转录合成TARRNA。用毛细管电泳观察Tat与TAR的结合活性，并用转录抑制活性化合物AP064检验对Tat-TAR结合的阻断作用。结果显示，制备的Tat和TAR能相互结合，并被AP064有效阻断，表明此模型可用于筛选抑制Tat-TAR结合的化合物。