毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时，在胰岛素前体的N末端引入一段由10个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化，得到的样品经过MALDITOFMS和N末端测序，证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象，并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实，利用毕赤酵母得到的胰岛素前体，经胰蛋白酶酶切后，生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30，且C末端未发生降解，这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。