宽体沙鳅(Botia reevesae)热休克蛋白70 基因的克隆及表达分析

为深入分析热休克蛋白响应胁迫的分子机制, 实验以宽体沙鳅(Botia reevesae)为研究对象, 利用同源克隆和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术克隆得到宽体沙鳅热休克蛋白70(heat shock protein, BR-HSP70)的cDNA全长。结果发现, BR-HSP70 cDNA 全长为2371bp, 包含1947bp的开放阅读框(opening reading frame, ORF), 102bp 5′-非编码区(untranslated region, UTR)和322bp 3′-UTR等。通过序列同源性比对发现, BR-HSP70 cDNA 与团头鲂(Megalobrama amblycephala)和猪(Sus scrofa)的同源性分别为98%及83%, 且ORF编码的649 个氨基酸中含有HSP70家族的家族信号标签、N-糖基化位点及EEVD等保守区域。结果表明, 克隆的cDNA为宽体沙鳅HSP70基因。实时荧光定量PCR分析发现, 氨氮胁迫和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)侵染均会显著上调宽体沙鳅鳃、肝脏及肾脏HSP70 mRNA的表达(P<0.05), 表明HSP70基因在宽体沙鳅应对环境胁迫中发挥了重要的抗应激作用。