草鱼出血病病毒VP7蛋白基因的人工合成与原核表达

根据GenBank已发表的GCRV VP7蛋白基因序列, 设计合成2条特异性引物和19条搭桥引物, 通过搭桥PCR人工合成带有3处变异碱基的GCRV VP7蛋白基因整个编码框, 经过酶切、连接、PCR鉴定和测序鉴定克隆到原核表达载体pCold TF中, 并转化大肠杆菌BL21(DE3), 进行IPTG诱导表达和表达产物的SDS-PAGE、Western-blotting 分析、纯化以及反应原性的iELISA检测。结果表明, 成功人工合成了长831bp的GCRV VP7蛋白基因编码框和构建了VP7蛋白基因的重组质粒pCold TF-VP7, pCold TF-VP7转化菌经IPTG(1mmol/L)诱导3—4h即可获得特异性蛋白VP7重组蛋白的高效表达, VP7重组蛋白相对分子量大小约为73.9ku, 与预期大小相符, 且与鼠抗GCRV血清有良好反应原性。