锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

于1995年2月在厦门海域采集锯缘青蟹，取其内脏经正丁醇抽提、硫酸铵分级分离、DEAE-52离子交换柱层析及Sephadex G-200凝胶过滤柱层析纯化，获得碱性磷酸酶制剂，以快速蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验其纯度，获得单一蛋白纯的酶制剂。研究酶的物理性质得出该酶的紫外特征吸收峰在278nm处，荧光激发光谱特征峰在282nm处，荧光发射光谱特征峰在343nm处，全酶分子量为78kD。研究酶催化对－硝基苯磷酸二钠水解的动力学性质，金属离子及有机溶剂对其活力的影响，得知该酶水解对－硝基苯磷酸二的最适温度为52℃，最适pH为9.2，米氏常数为6.67×10-4 mol/L，酶活性中心的转换常数为460 min-1；Mg2+对酶有显著的激活作用；Cn2+，Hg2+和甲醇、乙醇、乙二醇对酶有不同程度的抑制，说明在一定条件下，效应物引起酶分子构象发生了不同程度的变化。