短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA, 反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM-T Easy Vector系统的T载体上, 重组子进行碱基序列测定。结果表明, 所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子ATG到终止密码子TGA的2055bp，编码684个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的2061bp, 编码686个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为78153Da, 等电点pI为6.25；斑节对虾则为78581Da, pI为5.83。用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性, 二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为93%和92%；对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关；不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。