泥蚶(Tegillarca granosa) cDNA 文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析

取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA, 纯化mRNA 后, 利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA 第一链, 通过LD-PCR 合成cDNA 双链, 经胶回收除去短片段, 与pDNR-LIB 载体进行连接, 电转化到大肠杆菌DH10B 中, 构建形成原始文库, 进行滴度测试和重组率鉴定。结果表明原始文库的滴度为3.17×105 cfu/ml, 重组率为86.3%, 插入片段多在500—2500bp 间。随机挑选458 个克隆测序, 经分析获得94 种已知基因及87 种未知基因。其中包括铁结合蛋白(Ferritin)的全长cDNA 序列。该基因序列全长895bp, 5'-端非编码区为163bp, 3'-非编码区为213bp, 开放阅读框为519bp, 编码172 个氨基酸。推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa 和4.89。氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%—82%。比对结果表明, 铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守。