无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) 三重PCR 快速检测方法的建立与应用

参照GenBank 发表的无乳链球菌sip、cpsE 这两个高度保守基因设计两组特异性引物, 应用已报道的无乳链球菌cpsL 基因高度保守序列的引物作为阳性对照引物, 经反应条件和反应体系参数优化, 建立一种检测无乳链球菌的三重PCR 方法, 并应用本三重PCR 方法检测40尾人工感染罗非鱼样本和22尾临床上收集的疑似无乳链球菌感染鱼样本。结果表明, 所建立的三重PCR 方法具有良好特异性, 检测无乳链球菌DNA样本时出现三条扩增条带, 检测其他7 种供试菌株DNA则不出现出任何扩增条带, 对无乳链球菌DNA 样本的最低检测浓度为 0.32ng/μ l, 最适Mg2+浓度为37.5mmol/L, 整个检测过程耗时100min左右。40尾人工感染罗非鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为100%, 22尾疑似无乳链球菌感染鱼的肝脏、肾脏组织DNA样本阳性检出率分别为72.7%, 以上两批样本检测结果与常规细菌鉴定方法结果一致。